尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum beta)

发布时间:2019-11-02 作者:baidu.com 分类:www.88365365.com
Pusia pastoris中BusA.-葡萄糖苷酶基因的克隆与表达
少量沙
摘要:为高效表达TNF,IFN及其他抗肿瘤药物奠定基础,克隆了Sacchromycopsis fibuligera(葡萄糖苷酶基因(BGL1)和在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达)。
基于葡萄糖苷酶属(BGL1)的序列和毕赤酵母表达载体的多克隆位点PPIC9K设计两对PCR引物。
将具有SHF和SHR作为引物的PCR产物连接到载体pGEMΔT中以构建pSHLTV。
用限制酶消化靶基因将其插入巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中。将其置于(因子 - 信号肽)的下游并与相同的开放阅读框(ORF)共享。构建重组质粒pSHL9K。
通过电穿孔将重组质粒pSHL9K转化到巴斯德毕赤酵母的GS115菌株中,并整合到染色体中以获得稳定且有效表达BGL1基因的重组巴斯德毕赤酵母菌株。获得含有最高拷贝数的靶基因的重组菌株。
重组酶的最适温度为50℃,最适pH为5。
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通过优化表达条件,培养液中总蛋白含量可达9 g / L或更高,培养液(葡萄糖苷酶活性为47 IU / ml,相对分子量为目标蛋白,SDS根据-PAGE,它大约是113 kDa。
(葡糖苷酶可降解纤维二糖,葡糖苷-N-酰基鞘氨醇,糊精等( - 葡糖苷)。
人体缺乏(葡萄糖苷酶导致葡萄糖苷-N-酰基鞘氨醇的积累并引起戈谢病)。
(葡糖苷酶可用于诊断和治疗肿瘤。
毕赤酵母可以通过其抗肿瘤作用如TNF和IFN有效地表达细胞因子。本研究深入研究该表达系统,有助于表达更多的抗肿瘤药物。
本研究首次在毕赤酵母中表达尖孢镰刀菌(葡萄糖苷酶)基因,实验表明,获得了稳定有效表达BGL1基因的重组毕赤酵母菌株。
[学位授予单位]:延边大学[学年]:硕士课程[评分年份]:2003年[分类编号]:Q785
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